国家农业部人工授精操作规程

Regulation for swine artificial insemination techniques

1.范围

本标准规定猪采精、精液品质检查、精液的稀释、分装、贮存与运输、输精等人工授精技术环节，适用于猪的人工授精操作。

2.采精

2.1公猪调教

2.1.1调教年龄：后备公猪7～8月龄可开始调教，已本交配种的公猪也可进行采精调教。

2.1.2调教方法：将成年公猪的精液、包皮部分泌物或发情母猪尿液涂在假台猪后部，将公猪引至假台猪训练其爬跨，也可用发情母猪引诱公猪，待公猪************兴奋时，快速隔离母猪，调教公猪爬跨台猪，每天可调教1～2次，但每次调教时间最好不超过15min。

2.2采精方法

2.2.1采精前准备

采精公猪的准备：剪去公猪包皮部的长毛，将公猪体表脏物冲洗干净并擦干体表水渍。

采精器件的准备：集精器置于38℃的恒温箱中备用。当公猪引至采精室后，迅速取出集精器，另外应准备好采精时清洁公猪包皮内污物的纸巾或消毒清洁的干纱布等。

配制精液稀释液：配制好所需量的稀释液，置于在水浴锅中预热至35℃。

精液质检设备的准备：调节好质检用的显微镜，开启显微镜载物台上恒温板以及预热精子密度测定仪。

精液分装器件的准备：准备好精液分装器、精液瓶或袋等。

2.2.2 采精程序

采精员一手带双层乳胶手套，另一手持37℃保温杯(内装1次性食品袋)用于收集精液，用0.1%高锰酸钾溶液清洗其腹部和包皮，再用温水清洗干净，避免药物残留对精子的伤害。

采精员挤出公猪包皮积尿，按摩公猪包皮部，刺激其爬跨假台猪，待公猪爬跨假台猪并伸出阴茎，脱去外层手套，用手（大拇指与************方向一致）紧握伸出的公猪阴茎螺旋状************，顺其向前冲力将阴茎的“S”状弯曲延直，握紧阴茎************防止其旋转。待公猪射精时用2～3层纱布过滤收集浓份或全份精液于保温杯内的一次性食品袋内，最初射出的少量(5mL左右)精清不接取，直到公猪射精完毕，一般射精过程历时5～7min。

2.3采精频率

采精频率以单位时间内获得最多的有效精子数决定，做到定点、定时、定人。成年公猪每周采精不超过2～3次，青年公猪每周1～2次。

3.精液品质检查

3.1采精量

采集精液后秤重，避免以量筒等测量精液体积。

3.2颜色

正常的精液是乳白色或浅灰白，精子密度越高，色泽愈浓，其透明度愈低。如带有绿色、黄色、淡红色、红褐色等异常颜色的精液应废弃。

3.3气味

猪精液略带腥味，如有异常气味，应废弃。

3.4pH值

以pH计或pH试纸测量，正常范围7.0～7.8。

3.5精子活力检查

精子活力是指呈直线运动的精子所占百分率，在显微镜下观察，一般按0.1～1.0的十级评分法估测，鲜精活力要求不低于0.7，检查活力时要求载玻片和盖玻片都应37℃预热。

3.6精子密度

指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要指标。要求用血细胞计数板进行计数或精液密度仪测定。血细胞计数板计数方法：① 以微量加样器取具有代表性原精液200μL，用3% NaCl稀释10倍；② 在血细胞计数板上放一盖玻片，取1滴稀释后精液置于计数板的槽中，靠虹吸将精液吸入计数室内；③ 在高倍镜下计数5个中方格内的精子总数，将该数乘以50万，即得精子密度。

3.7精子畸形率

畸形率是指异常精子的百分率，一般要求畸形率不超过18%，其测定可用普通显微镜，但需伊红或姬姆沙染色，相差显微镜可直接观察精子畸形率。畸形精子种类很多，如：巨型精子、短小精子、双头或双尾精子，顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或与尾部分离、尾部变曲。要求每头公猪每两周检查一次精子畸形率。

3.8填写公猪精液品质检查登记表。

4.精液稀释、分装、贮存和运输

4.1稀释液

4.1.1稀释液：按稀释液配方，也可采用自制稀释液，用称量纸、电子天平准确称量药品。

4.1.2 按1000mL、2000mL剂量称量稀释粉，置于密封袋中。

4.1.3 使用前1小时将称量好的稀释粉溶于定量的双蒸水中，可用搅拌器助其溶解。

4.1.4 用0.1N稀盐酸或0.1N氢氧化钠调整稀释液的pH值为7.2(6.8～7.4)左右，稀释液配好后应及时贴上标签，标明品名、配制日期和时间、经手人等，配制好的稀释液在1小时后方可用于稀释精液。

4.1.5 稀释液在4℃恒温箱中保存，保存时间不超过24小时。

4.2精液稀释

4.2.1精液采集后应尽快稀释，原精贮存不超过20分钟。

4.2.2稀释液与精液要求等温稀释，两者温差不超过1℃，即稀释液应加热至33～37℃，以精液温度为标准，来调节稀释液的温度，绝不能反过来操作。

4.2.3稀释时，将稀释液沿集精杯(瓶)壁缓慢加入到精液中，然后轻轻摇动或用消毒后的玻璃棒搅拌，使之混合均匀。

4.2.4如作高倍稀释时，应先作低倍稀释（1:1～2），待半分钟后再将余下的稀释液沿壁缓慢加入。

4.2.5稀释倍数的确定：要求每次输精剂量含有效精子数30亿以上，输精量为80～100mL确定稀释倍数。

4.2.6稀释后要求静置约5min再作精子活力检查，如果稀释前后活力无太大变化，即可进行分装与保存；如果活力显著下降，不要使用。

4.2.7混合精液：新鲜精液首先按1:1稀释，根据精子密度和混合精液的量计算需加入稀释液的量，将部分稀释后精液放入水浴锅保温，混合2头以上公猪精液置于容器，加入剩余部分稀释液（要求与精液等温），混匀后再行分装。

4.3精液分装

4.3.1调好精液分装机，以每80～100mL为单位，将精液分装至精液瓶或袋。

4.3.2在瓶或袋上标明公猪品种、耳号、生产日期、保存有效期、稀释液名称和生产单位等。

4.4 精液贮存

4.4.1      精液置于室温（25℃）1～2h后，放入17℃恒温箱贮存，也可将精液瓶或袋用毛巾包严直接放入17℃恒温箱内。

4.4.2      短效稀释液可保存3天、中效稀释液可保存4～6天、长效稀释液可保存7～9天，无论何种稀释液保存精液，应尽快用完。

4.4.3      每隔12小时轻轻翻动一次，防止精子沉淀而引起死亡。

4.5精液运输

精液运输应置于保温较好的装置内，保持在16～18℃，精液运输过程中避免强烈震动。

5.输精

5.1输精时间

发情母猪出现静立反射后8～12hrs进行第1次输精，之后每间隔8～12hrs进行第2或第3次输精。

5.2精液检查

从17℃恒温箱中取出精液，轻轻摇匀，用已灭菌的滴管取1滴放于预热的载玻片，置于37℃的恒温板上片刻，用显微镜检查活力，精子活力≥0.7，方可使用。

5.3输精管

用灭菌过的输精管进行输精。

5.4输精程序

5.4.1 输精人员消毒清洁双手。

5.4.2 清洁母猪外阴、尾根及臀部周围，再用温水浸湿毛巾，擦干外阴部。

5.4.3 从密封袋中取出灭菌后的输精管，在其前端涂上润滑液。

5.4.4 将输精管45度角向上插入母猪生殖道内，当感觉有阻力时，缓慢逆时针旋转，同时前后移动，直到感觉输精管被子宫颈锁定，确认输精部位。

5.4.5 从精液贮存箱取出品质合格的精液，确认公猪品种、耳号。

5.4.6 缓慢颠倒摇匀精液，用剪刀剪去瓶（管）嘴（或撕开袋口），接到输精管上，轻轻挤压确保精液能够流出输精瓶（管、袋）。

5.4.7 控制输精瓶（管、袋）的高低及挤压力度来调节输精时间，输精时间要求3～10min。

5.4.8 当输精瓶（管、袋）内精液排空后，放低输精瓶（管、袋）约15s，观察精液是否回流到输精瓶，若有倒流，再将其输入。

5.4.9 在防止空气进入母猪生殖道的情况下，使输精瓶（管、袋）在生殖道内滞留5min以上，让其慢慢滑落。

5.4.10 登记输精记录表。